由于細菌懸液的濃度與光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來(lái)推知菌液的濃度,并將所測的OD值與其對應的培養時(shí)間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長(cháng)曲線(xiàn),此法快捷、簡(jiǎn)便。生長(cháng)曲線(xiàn)反映了單細胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養時(shí)所表現出的群體生長(cháng)規律。依據其生長(cháng)速率的不同,一般可把生長(cháng)曲線(xiàn)分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。這四個(gè)時(shí)期的長(cháng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過(guò)測定微生物的生長(cháng)曲線(xiàn),可了解各菌的生長(cháng)規律,對于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導意義。
比濁法的操作步驟如下:
(1)種子液制備取大腸桿菌斜面菌種1支,以無(wú)菌操作挑取1環(huán)菌苔,接人肉膏蛋白胨培養液中,靜止培養18h作種子培養液。
(2)標記編號取盛有50mL無(wú)菌肉膏蛋白胨培養液的250mL三角瓶11個(gè),分別編號為0,1.5,3,4,6,8,10,12,14,16,20hom。
(3)接種培養用2mL無(wú)菌吸管分別準確吸取2mL種子液加入已編號的11個(gè)三角瓶中,于37℃下振蕩培養。然后分別按對應時(shí)間將三角瓶取出,立即放冰箱中貯存,待培養結束時(shí)一同測定OD值。
(4)生長(cháng)量測定將未接種的肉膏蛋白胨培養基傾倒入比色杯中,選用600m波長(cháng)分光光度計上調節零點(diǎn),作為空白對照,并對不同時(shí)間培養液從0h起。依次進(jìn)行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養基適當稀釋后測定,使其OD值為0.10~0.65,經(jīng)稀釋后測得的OD值要乘以稀釋倍數,オ是培養液實(shí)際的OD值。
(5)結果將測定的OD值填入表中,以時(shí)間為橫坐標,ODom值為縱坐標,繪制大腸桿菌的生長(cháng)曲線(xiàn)。目前市場(chǎng)上已經(jīng)有微生物比濁法測定儀銷(xiāo)售,這樣就可以大大減少實(shí)驗工作量,提高實(shí)驗的準確性。
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